10 Le Test d'Ouchterlony

L'immunodiffusion double (ou immunodiffusion double d'Ouchterlony ou test d'Ouchterlony) est une technique immunologique utilisée dans la détection, l'identification et la quantification d'anticorps et d'antigènes, comme les immunoglobulines et les antigènes nucléaires. Cette technique est nommée d'après Örjan Ouchterlony, un physicien suédois qui a inventé le test en 1948.

Une couche de gélose contenue dans une boîte de Pétri est percée de trous (ou "puits") de façon équidistante un puit central et des puits extérieur. Il existe deux configurations possibles : Anticorps AC  en puits central et Antigènes AG en puits extérieurs ou l’inverse. On les laisse les solutions diffuser dans la gélose autour de leurs puits respectifs pendant 48 heures. Là où les fronts de diffusion se rencontrent, si les anticorps reconnaissent un des antigènes, ils s'y lient et forment un complexe immun. Le complexe immun créera un précipité blanc en forme de ligne ou d'arc, ce qui est une signature visuelle de la reconnaissance d'un antigène. La partie convexe de l’arc de précipitation est toujours orientée du côté du puits de l’antigène.

Résultat d’un test d’Ouchterlony avec des antigènes au centre et des sérums contenant des AC à l'extérieur : 

résultat séropositif pour les individus 1 et 4 concernant l’Ag AIE.

source : Immunofiffusion.jpg par DarreenvtVia wikimédia commons,  CC-BY-SA-4.0, https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Immunofiffusion.jpg?uselang=fr

Plusieurs utilisations de ce test sont possibles :

• Prouver la spécificité d’un anticorps vis à vis d’un antigène : placer un  sérum contenant un AC précis dans le puits central et placer des antigènes connus dans les puits extérieurs. La présence d’un seul arc de précipitation entre le puits central et un des puits extérieurs traduira la spécificité de l’AC contre un AG donné.

• Vérifier la sérologie d’un patient en identifiant les anticorps contenus dans son sérum :  Un individu infecté par un agent infectieux a développé des anticorps, il est alors dit séropositif. On cherche à détecter ces anticorps dans son sérum. Pour cela il faut placer le sérum du  patient dans le puits central et placer des antigènes connus dans les puits extérieurs. La présence d’arcs de précipitation entre le puits central et certains puits extérieurs traduira la séropositivité de l'individu pour les antigènes contenus dans ces puits. 

• Identifier les antigènes contenus dans un sérum d’un patient : Un individu infecté possède dans son sérum des agents pathogènes porteurs de molécules particulières identifiées comme des antigènes. On cherche à les mettre en évidence. Pour cela il faut placer le sérum du patient dans le puits central et placer dans les puits extérieurs des solutions d’anticorps dirigés contre différents antigènes connus et recherchés chez ce patient. La présence d’arcs de précipitation entre le puits central et certains puits extérieurs traduira la présence d’antigènes et donc d’agents infectieux dans le sérum de l'individu. 

• Prouver que la production d’AC fait suite à un contact avec un AG ou effectuer la sérologie de plusieurs patients en même temps : Un individu infecté par un agent infectieux a développé des anticorps. On cherche à mettre en évidence en même temps chez plusieurs patients la présence ou l’absence de ces anticorps. Pour cela il faut verser dans le puits central une solution contenant l’antigène de l’agent infectieux recherché chez ces patients. Les puits extérieurs vont contenir chacun un sérum de patient à diagnostiquer. Les arcs de précipitation indiqueront les patients séropositifs c’est à dire contenant les AC dirigés contre les AG de l’agent infectieux en question (exemple test de séropositivité pour le VIH). 

Arc de précipitation dans le cas où les deux puits extérieurs sont différents.

Dans le cas où les puits extérieurs contiennent des antigènes, si deux arcs de précipitations issus de deux puits voisins se croisent, cela signifie que les deux puits contenaient des antigènes différents et que le sérum de l’individu était séropositif pour ces deux antigènes. 

source : Ouchtherlonypatterns antigen id.jpg, par Reluco via wikimédia commons, domaine public, https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Ouchtherlonypatterns_antigen_id.jpg

Arc de précipitation dans le cas où les deux puits extérieurs sont exactement identiques.

Si les deux arcs de précipitations issus de deux puits voisins se rejoignent, cela signifie que les deux puits contenaient des antigènes identiques et que le puit central ne contenait qu’une seule sorte d’AC.

source : Ouchtherlonypatterns antigen id.jpg, par Reluco via wikimédia commons, domaine public, https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Ouchtherlonypattern_no-id.jpg

Schéma bilan :

Immunité adaptative 3 : Test d'Ouchterlony - SVT - SANTÉ 1ère spé #10 - Mathrix